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  农业环境科学学报  2021, Vol. 40 Issue (1): 92-101  DOI: 10.11654/jaes.2020-0376
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引用本文  

杜志敏, 向凌云, 杜凯敏, 等. 磷灰石、石灰对Cd胁迫下黑麦草根形态及Cd吸收影响研究[J]. 农业环境科学学报, 2021, 40(1): 92-101.
DU Zhi-min, XIANG Ling-yun, DU Kai-min, et al. Effects of apatite and lime on root morphology and cadmium uptake by ryegrass under cadmium stress[J]. Journal of Agro-Environment Science, 2021, 40(1): 92-101.

基金项目

国家自然科学基金项目(32001206,31800361);河南省重点研发与推广专项(212102310227);河南省科学院科研开发专项(210605007,210905004,200605005,190305003)

Project supported

The National Natural Science Foundation of China(32001206, 31800361); Key Research and Development and Promotion Projects in Henan Province(212102310227); The Research and Development Project of Henan Academy of Sciences(210605007, 210905004, 200605005, 190305003)

通信作者

甄静  E-mail:13629843529@163.com

作者简介

杜志敏(1985-), 女, 河南武陟人, 博士研究生, 助理研究员, 主要从事土壤重金属污染修复研究。E-mail:duzhimin324@163.com

文章历史

收稿日期: 2020-04-03
录用日期: 2020-08-04
磷灰石、石灰对Cd胁迫下黑麦草根形态及Cd吸收影响研究
杜志敏1,2 , 向凌云1 , 杜凯敏3 , 杨文玲1 , 王继雯1 , 雷高1 , 郭雪白4 , 郭亮3 , 周静5 , 巩涛1 , 陈国参1 , 甄静1     
1. 河南省科学院生物研究所有限责任公司, 郑州 450008;
2. 河南工业大学环境工程学院, 郑州 450001;
3. 河南省河川工程监理有限公司, 郑州 450000;
4. 河南水利与环境职业学院, 郑州 450008;
5. 中国科学院南京土壤研究所, 南京 210008
摘要:为考察磷灰石、石灰和黑麦草对Cd污染土壤的修复效果,通过盆栽试验研究了不同剂量磷灰石(0、6、12、24 g·kg-1风干土,编号为CK、L1、L2、L3)和石灰(1、2、4 g·kg-1风干土,编号为S1、S2、S3)对Cd胁迫下黑麦草生物量、根形态、黑麦草Cd含量、Cd富集量、富集系数、土壤pH、土壤有效态Cd含量等的影响。结果表明,磷灰石、石灰处理(L1,S1除外)显著增加了黑麦草生物量、根长、根表面积、根体积、根尖数、Cd富集量和土壤pH,显著降低了黑麦草Cd含量、Cd富集系数、根平均直径和土壤有效态Cd含量。相关性分析结果表明:除根平均直径为正相关关系外,黑麦草根长、根表面积、根体积、根尖数与土壤有效态Cd含量、黑麦草地上部分及根系Cd含量、Cd富集系数呈显著或极显著负相关关系;除根平均直径为负相关关系外,其他根指标与黑麦草地上部分及根系生物量、Cd富集量呈极显著正相关关系。其中,L3处理黑麦草地上部分及根系生物量达到CK处理(不添加改良剂)的176.0倍和174.4倍;根平均直径相比CK降低了29.4%,根长、根表面积、根体积和根尖数分别为CK处理的20.2、21.0、21.3倍和24.5倍;黑麦草地上部分及根系Cd富集量达到CK处理的89.6倍和100.9倍。研究表明,根形态受土壤有效态Cd含量的影响显著,并可通过影响黑麦草生物量及Cd吸收决定其Cd富集量,施用24 g·kg-1的磷灰石并种植黑麦草能很好地修复Cd污染土壤。
关键词Cd    黑麦草    根形态    Cd吸收    磷灰石    石灰    
Effects of apatite and lime on root morphology and cadmium uptake by ryegrass under cadmium stress
DU Zhi-min1,2 , XIANG Ling-yun1 , DU Kai-min3 , YANG Wen-ling1 , WANG Ji-wen1 , LEI Gao1 , GUO Xue-bai4 , GUO Liang3 , ZHOU Jing5 , GONG Tao1 , CHEN Guo-can1 , ZHEN Jing1     
1. Institute of Biology Co. Ltd., Henan Academy of Sciences, Zhengzhou 450008, China;
2. School of Environmental Engineering, Henan University of Technology, Zhengzhou 450001, China;
3. Henan Hechuan Construction Supervision Co., Ltd, Zhengzhou 450000, China;
4. Henan Vocational College of Water Conservancy and Environment, Zhengzhou 450008, China;
5. Institute of Soil Science, Chinese Academy Sciences, Nanjing 210008, China
Abstract: A pot experiment was conducted to test the remediation effects in Cd contaminated soil by applying apatite(CK, L1, L2, and L3 at dosages of 0, 6, 12, and 24 g·kg-1, respectively)and lime(S1, S2, and S3 at dosages of 1, 2, and 4 g·kg-1, respectively). The biomass, root morphology, Cd concentration and accumulation, bioaccumulation factors, soil pH, and available Cd content in soil were measured. The results showed that apatite and lime(except L1 and S1)significantly increased soil pH, biomass, and root length, surface area, volume, tips number, and Cd accumulation in ryegrass, but significantly decreased Cd concentration, bioaccumulation factors, average root diameter, and soil Cd availability. Correlation analysis showed that the root length, surface area, volume, and tips number(root average diameter), had significant negative(posivive) linear correlations with the available Cd content in soil, Cd concentration, and bioaccumulation factors in ryegrass, while these had significant positive(negative)linear correlations with aboveground and root biomass and Cd accumulation in ryegrass. Compared to controls, L3 increased the aboveground and root biomass of ryegrass by 176.0 and 174.4 times; decreased the average root diameter by 29.4%; increased the root length, surface area, volume, and tips number by 20.2, 21.0, 21.3, and 24.5 times, respectively; and increased Cd accumulation in the aboveground parts and the root by 89.6 and 100.9 times, respectively. In general, root morphology could significantly be affected by the availability of Cd in soil, which in turn affects the biomass and uptake of Cd, and also determines the Cd accumulation in ryegrass. Thus, combining apatite at a dosage of 24 g·kg-1 with ryegrass could effectively remediate Cd-contaminated soil.
Keywords: Cd    ryegrass    root morphology    Cd uptake    apatite    lime    

随着城市化、工业化进程加快及农业集约化的发展,土壤重金属污染问题日益加剧,严重危害食品安全并威胁人类健康,已成为影响我国社会、经济发展的重要环境问题。Cd是人体非必需营养元素,具有致癌、致畸和致突变作用,会造成骨骼病变、肾功能损伤、肝肾和肺机能不全、遗传及免疫系统等损伤,并诱发多种癌症[1-3]。众所周知的公害病“痛痛病”就是由于日本当地居民长期食用“镉米”和饮用含Cd的水而引起的疾病[4]。2014年我国原环境保护部和原国土资源部公布的《全国土壤污染状况调查公报》指出,全国土壤总超标率为16.1%,污染类型以无机型为主,其中Cd的点位超标率达到7.0%,超标率为无机污染物之首,Cd污染土壤的治理和修复工作迫在眉睫。相对于重金属污染土壤的物理修复和化学修复,利用富集植物将重金属从土壤中提取出来的植物修复技术表现出许多优势,如修复成本低、环境扰动小、不破坏土壤结构、二次污染少或无二次污染、利于污染区域景观恢复、适用于大面积重金属污染场地修复等[5]。而重金属污染严重区域,植物生长因受到重金属胁迫常表现出生长缓慢、生物量低等症状,因此,将生物修复与化学修复相结合的联合修复技术受到研究者推崇,以期通过此方法快速、高效治理重金属污染土壤。

黑麦草是Cd、Zn等重金属的富集植物,虽然其吸收重金属的能力不如超积累植物,但其拥有先锋植物特性,生长快、生物量大、再生能力强、易于种植、抗病虫害能力强、对重金属Cd、Zn等有很强的抗性和蓄积作用,因此常作为修复植物被用于重金属污染土壤的修复研究[6-7]。根系作为植物与土壤直接接触的器官,是植物体吸收和代谢营养物质及毒性物质的器官,一方面植物根系形态会受到环境变化的影响,表现出很好的发育可塑性[8];另一方面根系形态结构影响着植物对Cd的吸收和木质部装载,进而影响Cd在植物组织中的积累[9-10]。Cd胁迫引起的根损伤可能与其抑制酶活性相关,主要表现为损伤根尖细胞核、抑制核糖核酸酶活性、改变RNA合成;抑制植物根部Fe3+还原酶活性,导致植物Fe2+缺乏;抑制根部硝酸还原酶活性,减少根部对硝酸盐的吸收及向地上部的转运[11]

植物根系形态、生长和空间分布直接决定着植物对重金属的吸收能力及效率。植物在Cd胁迫下积累过量重金属后,根系生长会受到抑制,从而降低植物对Cd的吸收能力[9, 12]。王效瑾等[13]研究发现,在高浓度Cd处理下,小麦幼苗的根长、根体积和总根尖数降低,但根系平均直径逐渐增加。夏雪姣等[14]研究指出,Cd浓度升至40 mg·L-1时,小麦根的生长受到强烈抑制,中育10号根长下降69%,洛麦23根长下降80%。Ostonen等[15]研究发现花生在Cd胁迫下,其根长、根表面积、根体积和总根尖数均下降,根系平均直径增加。植物根尖是重要的吸收部位,土壤有效态Cd含量高的对照处理,黑麦草根尖数量最低,表明黑麦草根系侧根形成受Cd胁迫的抑制,这是植物对Cd胁迫的重要响应[10, 14]。冯汉青等[16]研究发现,小麦幼苗水培条件下加入Cd会导致小麦幼根根长降低,鲜质量及干质量下降。研究植物根系对重金属Cd胁迫的响应对于揭示植物抵抗重金属胁迫机理具有重要意义。目前,根形态受Cd胁迫影响的研究多为人工添加Cd的水培或土培试验,但条件更为复杂的原位Cd污染土壤研究较少。本研究针对目前严峻的土壤Cd污染形势,通过盆栽试验研究磷灰石、石灰对Cd胁迫下黑麦草生长、根形态、Cd含量、Cd富集量和Cd富集系数等的影响,研究黑麦草根系对Cd胁迫的响应及根形态对黑麦草吸收和转运Cd的影响,为植物修复技术顺利开展提供理论与技术支持。

1 材料与方法 1.1 供试材料

供试土壤:土壤样品采集自江西省贵溪市某冶炼厂周边的污染农田,该处田块因重金属污染严重已经废弃数年,土壤沙化及酸化严重。去除土壤表层枯枝落叶等杂物,采集0~20 cm的表层土壤,带回实验室后备用。土壤样品自然风干后,一部分用于后期盆栽试验,一部分用于土壤理化性质检测。土样基本理化指标如下:土壤pH(土水质量比1:2.5)5.60;容重1.32 g·cm-3;有机质1.62 g·kg-1;全氮0.88 g·kg-1;有效磷66.90 mg·kg-1;速效钾45.10 mg·kg-1;全Cd 8.24 mg·kg-1;全Hg 0.06 mg·kg-1;全As 32.30 mg·kg-1;全Pb 60.21 mg·kg-1;全Cr 11.86 mg·kg-1。参照《土壤环境质量农用地土壤污染风险管控标准(试行)》(GB 15618—2018),土壤Hg、As、Pb、Cr含量均低于农用地土壤污染风险筛选值,而Cd含量达到农用地土壤污染风险管制值(5.5 < pH < 6.5,2.0 mg·kg-1)的4.12倍。

供试改良剂:石灰购自郑州建材大市场,pH 12.4,Cd含量0.16 mg·kg-1,粒径0.25 mm。磷灰石购自郑州建材大市场,pH 8.2,Cd含量0.07 mg·kg-1,粒径0.16 mm。供试肥料:河南“心连心”牌复合肥(总养分45%,N、P2O5K2O各为15%)购自河南省新乡市心连心化肥有限公司。供试植物:重金属富集植物黑麦草(Lolium perenne L.)购自河南秋乐种业科技股份有限公司。

1.2 试验设计

试验共设置7个处理,每个处理设置3次重复。不添加改良剂的对照处理记为CK,添加低、中、高剂量磷灰石(磷灰石占风干土壤质量比分别为6、12、24 g·kg-1)的处理分别记为L1、L2、L3,添加低、中、高剂量石灰(石灰占风干土壤质量比分别为1、2、4 g·kg-1)的处理分别记为S1、S2、S3。

土样自然风干后过2 mm尼龙筛,选取直径32 cm、高23 cm的塑料花盆进行盆栽试验。每盆称取(4.00±0.05)kg风干土,3.0 g复合肥,施入相应剂量磷灰石和石灰后充分混匀。浇水至田间持水量的70%,根据土壤干湿情况浇水并平衡2周。每盆均匀种植100粒黑麦草种子,覆土厚度0.5 cm左右。此后根据土壤干湿情况适时浇水,保持每盆浇水量一致。待黑麦草生长至刚抽穗时,分地上和根系两部分采集植物样品,并采集根际土壤样品,装入无菌自封袋带回实验室进行相应分析。植物样品按照杜志敏等[17]的方法进行处理,测定黑麦草地上部分、根系干质量和Cd含量,土壤样品风干后过尼龙筛,测定其pH和Cd含量。

1.3 样品分析

在黑麦草生长至刚抽穗时(黑麦草播种后45 d),采集植物样品,用去离子水冲洗干净后沥干水,取一部分植物样品置于烘箱中105 ℃杀青30 min,70 ℃烘干至恒质量,分别称量黑麦草地上部分和根系干质量。黑麦草根系样品尽可能完整采集,用去离子水冲洗干净,吸水纸吸干根系表面水分,均匀铺开,使用EPSON全自动根系扫描仪(Seiko Epson,日本)扫描根系,用WinRHIZO PRO 2009(Regent,加拿大)根系图像分析软件分析获得黑麦草根平均直径、根长、根尖数、根表面积和根体积等指标。土壤有效态Cd含量、黑麦草Cd含量按鲁如坤[18]的方法提取,并用原子吸收分光光度计(Hitachi z2000)测定。

Cd在植物体内由根系向地上部分转运的转运系数、富集系数计算公式分别为:

转运系数=植物地上部分Cd含量(mg·kg-1)/植物根系Cd含量(mg·kg-1

地上部分Cd富集系数=地上部分Cd含量(mg· kg-1)/土壤Cd含量(mg·kg-1

根系Cd富集系数=根系Cd含量(mg·kg-1)/土壤Cd含量(mg·kg-1)。

1.4 数据处理

采用Microsoft Excel 2010和SPSS 19.0对相关试验数据进行统计分析。

2 结果与分析 2.1 磷灰石、石灰对黑麦草生物量的影响

CK处理黑麦草出芽率低,出苗5 d后,大部分幼苗枯萎变黄,表现出中毒症状。Cd污染土壤施入磷灰石和石灰后,黑麦草生物量有不同程度增加,结果如图 1所示。黑麦草地上部分及根系生物量增加幅度均随着磷灰石和石灰添加剂量的增加而增大,L2处理黑麦草根系生物量达到CK的38.6倍,L3处理黑麦草地上部分和根系生物量分别达到CK的176.0倍和174.4倍,S2、S3处理地上部分生物量分别达到CK的72.2倍和130.2倍,S1、S2、S3处理根系生物量分别达到CK的53.3、80.1、154.8倍,且均与CK达到显著差异水平。

n=3,不同小写字母表示处理间差异显著(P < 0.05)。下同 n=3, the different lowercase letters indicate significant differences among treatments(P < 0.05). The same below 图 1 磷灰石、石灰对黑麦草生物量的影响 Figure 1 Effects of apatite and lime on the biomass of ryegrass
2.2 磷灰石、石灰对黑麦草根形态的影响

磷灰石和石灰处理后黑麦草根系形态变化情况如图 2所示。与CK相比,黑麦草根系平均直径显著降低,根长、根尖数、根表面积和根体积有不同程度增加。L2、L3、S2、S3处理黑麦草根长均显著高于CK处理,分别是CK的6.7、20.2、15.2、15.4倍。中、高剂量磷灰石和石灰处理黑麦草根尖细胞分裂增多,根尖数显著增加,其中L3处理根尖数显著高于其他处理,达到CK处理的24.5倍。L3处理黑麦草根表面积和根体积均最高,与CK相比显著增加了21.0倍和21.3倍,与其他6种处理均达到显著差异。

图 2 磷灰石、石灰对黑麦草根系形态的影响 Figure 2 Effects of apatite and lime on root morphology of ryegrass

黑麦草生物量与根形态指标的相关性分析如表 1所示。黑麦草地上部分和根系生物量呈极显著正相关关系,相关系数为0.979;黑麦草地上部分和根系生物量与根长、根表面积、根体积、根尖数均呈极显著正相关关系,与根平均直径呈极显著负相关关系;黑麦草根长、根表面积、根体积和根尖数4种根形态指标两两之间均呈极显著正相关关系;黑麦草根平均直径与根长、根表面积、根体积、根尖数均呈极显著负相关关系,相关系数分别为-0.746、-0.693、-0.651和-0.805。

表 1 黑麦草生物量与根形态指标的相关性分析 Table 1 Correlation analysis between biomass and root morphology of ryegrass
2.3 磷灰石、石灰对黑麦草不同部位Cd含量的影响

图 3可知,磷灰石和石灰处理不同程度地降低了黑麦草地上部分和根系的Cd含量。与CK相比,L1、L2和L3处理黑麦草地上部分Cd含量分别下降了36.4%、46.1%和47.1%,L2和L3处理黑麦草根系Cd含量分别下降了29.3%和41.9%,均与CK达到显著差异水平;S2和S3处理黑麦草地上部分Cd含量分别下降了28.2%和36.5%,S1、S2和S3处理黑麦草根系Cd含量分别下降了22.5%、31.5%和42.1%,均与CK达到显著差异水平。

图 3 磷灰石、石灰对黑麦草Cd含量的影响 Figure 3 Effects of apatite and lime on Cd content of ryegrass
2.4 磷灰石、石灰对黑麦草Cd富集量的影响

磷灰石、石灰对黑麦草地上部分和根系Cd富集量的影响如图 4所示。CK处理地上部分和根系Cd富集量均最低,施入磷灰石和石灰后Cd富集量有不同程度提高。与CK相比,L2和L3处理黑麦草地上部分Cd富集量分别增加了20.8倍和89.6倍,根系Cd富集量分别增加了27.1倍和100.9倍,均达到显著差异水平;S1、S2和S3处理黑麦草地上部分Cd富集量分别增加了37.3、51.0倍和79.8倍,根系Cd富集量分别增加了41.5、55.3倍和89.3倍,均达到显著差异水平。

图 4 磷灰石、石灰对黑麦草Cd富集量的影响 Figure 4 Effects of apatite and lime on Cd accumulation of ryegrass

黑麦草Cd富集量与干质量、Cd含量的相关性分析结果如表 2所示,黑麦草地上部分与根系Cd富集量呈极显著正相关关系,相关系数为0.980。黑麦草地上部分和根系Cd富集量与地上部分和根系干质量均呈极显著正相关关系,与黑麦草根系Cd含量均呈极显著负相关关系。

表 2 黑麦草Cd富集量与黑麦草干质量、Cd含量的相关性分析 Table 2 Correlation analysis among Cd accumulation and biomass, root morphology of ryegrass
2.5 磷灰石、石灰对土壤有效态Cd含量及pH变化的影响

本试验结束时CK和磷灰石、石灰处理土壤Cd全量大小范围为7.98~8.24 mg·kg-1,且不同处理间无显著差异(数据未列出)。磷灰石、石灰对土壤有效态Cd含量及pH的影响如图 5所示。CK处理土壤有效态Cd含量为6.89 mg·kg-1,施入磷灰石、石灰后土壤有效态Cd含量出现不同程度降低。与CK相比,L1、L2和L3处理土壤有效态Cd含量分别降低了15.8%、27.2%和36.9%,S1、S2和S3处理土壤有效态Cd含量分别降低了6.3%、13.0%和17.6%,降低幅度随添加剂量增加而增大,均与CK达到显著差异水平。CK处理土壤pH为4.73,施入磷灰石、石灰后土壤pH显著提高,磷灰石和石灰对土壤pH的增加幅度均随添加剂量增加而增大,其中L3和S3处理增加效果最为显著,与其他处理均达到显著差异水平。土壤有效态Cd含量与土壤pH呈极显著负相关关系,相关系数为-0.667,表明土壤有效态Cd含量随土壤pH升高而降低。

n=3,图中不同小写字母表示土壤有效态Cd处理间差异显著(P < 0.05);不同大写字母表示土壤pH处理间差异显著(P <0.05) n=3, the different lowercase(uppercase)letters indicate significant differences in soil available Cd content(soil pH)among treatments(P < 0.05) 图 5 磷灰石、石灰对土壤有效态Cd含量及pH的影响 Figure 5 Effects of apatite and lime on soil available Cd content and pH
2.6 黑麦草Cd转运系数和富集系数

磷灰石、石灰对黑麦草Cd转运系数和富集系数的影响如图 6所示。与CK相比,磷灰石和石灰处理的黑麦草Cd转运系数无显著差异(图 6A)。CK处理黑麦草地上部分和根系Cd富集系数均最高(图 6B图 6C),施入磷灰石和石灰后,黑麦草地上部分和根系Cd富集系数有不同程度降低,其中中、高剂量磷灰石和石灰处理后地上部分和根系Cd富集系数显著降低。

图 6 磷灰石、石灰对黑麦草Cd转运系数和富集系数的影响 Figure 6 Effects of apatite and lime on translocation and bioconcentration factors
2.7 土壤有效态Cd含量、黑麦草Cd含量、Cd富集量与根形态指标的相关性

土壤有效态Cd含量、黑麦草Cd含量、Cd富集量与根形态指标的相关性分析如表 3所示。土壤有效态Cd含量与黑麦草地上部分、根系Cd含量均呈极显著正相关关系,与黑麦草地上部分、根系Cd富集量均呈极显著负相关关系;土壤有效态Cd含量与黑麦草根长、根表面积、根体积、根尖数均呈极显著负相关关系,与黑麦草根平均直径呈显著正相关关系。黑麦草地上部分和根系Cd含量与根长、根表面积、根体积、根尖数呈显著或极显著负相关关系,与黑麦草根平均直径呈显著或极显著正相关关系。黑麦草地上部分和根系Cd富集量与黑麦草根长、根表面积、根体积、根尖数均呈极显著正相关关系,与黑麦草根平均直径均呈极显著负相关关系。黑麦草地上部分和根系Cd富集系数与土壤有效态Cd含量呈极显著正相关关系,与根长、根表面积、根体积、根尖数均呈显著或极显著负相关关系,与黑麦草根平均直径呈显著或极显著正相关关系。

表 3 土壤有效态Cd含量、黑麦草Cd含量、根形态指标的相关性分析 Table 3 Correlation analysis among soil available Cd and root morphology, Cd concentration of ryegrass
3 讨论 3.1 磷灰石、石灰对土壤pH及有效态Cd含量的影响

磷灰石、石灰是常见的重金属污染土壤改良剂,作为碱性改良剂,其降低重金属毒性主要通过提高土壤pH来实现[17, 19]。首先,土壤pH增加会增强土壤中有机/无机胶体及土壤黏粒对重金属离子的吸附能力,使土壤及土壤溶液中活性较高的有效态和交换态重金属离子数量减少,从而降低植物体的重金属含量[20];其次,土壤pH增加(OH-浓度高时),OH-易与重金属离子形成羟基态金属离子,该形态比自由态金属离子更易与土壤吸附位点结合[20-21];再次,土壤pH增加,土壤溶液OH-浓度升高,OH-易与重金属阳离子结合并生成难溶的M(OH)n沉淀物,进而降低土壤中重金属有效态含量。本试验结果显示,Cd污染土壤中施入磷灰石、石灰后,土壤pH显著增加,土壤有效态Cd含量显著降低,且土壤pH与土壤有效态Cd含量呈极显著负相关关系,这与前人研究结果一致[22-24]。此外,磷灰石作为常用的基肥,一方面可为植物生长提供磷素营养,另一方面能形成磷酸盐类重金属沉淀,从而降低土壤重金属生物有效性,最终达到促进植物生长的目的。石灰中的Ca2+、Mg2+等离子半径与Cd2+半径接近,对Cd2+有拮抗作用,极大地影响了Cd在土壤中的化学行为[25]。对于酸性及偏中性重金属污染土壤而言,施加磷灰石、石灰等碱性改良剂增加了土壤pH,能有效降低土壤有效态重金属含量,减轻土壤重金属对植物的毒性,达到促进植物生长及增加生物量的效果。

3.2 Cd胁迫对黑麦草生长及根形态的影响

Cd是植物生长的非必需营养元素,Cd2+的高度移动性致使其极易进入植物体,累积到一定程度后会损伤细胞膜及细胞活性物质,抑制光合作用及酶活性,影响植物正常新陈代谢,对植物生长产生毒害作用[26-29]。植物生物量是表征植物生长状况最直观的指标,能反映植物受毒害程度[30]。本试验结果显示,CK处理黑麦草地上部分和根系生物量均最低,施入高剂量磷灰石、石灰后,土壤有效态Cd含量显著降低,黑麦草生物量显著增加。这表明CK处理黑麦草遭受Cd毒害作用最大,黑麦草新陈代谢及生长受到严重影响,施入磷灰石、石灰后Cd对黑麦草的毒性降低,Cd对黑麦草生长的抑制作用减弱。

土壤有效态Cd含量与黑麦草根形态指标均呈极显著相关关系,而土壤Cd全量与黑麦草根形态各指标均无显著相关关系。这在一定程度上验证了总量法难以反映土壤重金属的生物有效性和移动性,而土壤有效态重金属可较好反映重金属的生物有效性和移动性,更易被植物吸收并影响植物根系生长及形态发育,对植物产生的毒害作用更强[31-32]。根系作为植物与土壤直接接触的器官,是植物吸收、代谢营养物质及毒性成分的主要器官[13]。根系形态与植物对养分、重金属的吸收能力有密切关系,在响应环境变化方面表现出高度的发育可塑性[9-10]。本试验结果表明,黑麦草生物量与根形态指标均呈极显著相关关系,表明根形态指标对植物吸收营养元素,促进植物生物量增加的重要性。Ostonen等[15]研究指出,花生在Cd胁迫条件下,根长、根表面积、根体积和总根尖数下降,根系平均直径增加。Lu等[10]对5个不同品种花生研究发现,Cd胁迫降低了花生根长、根表面积、比根长、总根尖数,但增加了根系平均直径。CK处理黑麦草根长、根尖数、根表面积和根体积均最低,根系平均直径最大,当土壤有效态Cd含量随着磷灰石、石灰施入而降低后,Cd对黑麦草的毒性降低,黑麦草的根长、根尖数、根表面积和根体积有不同程度增加,根系平均直径降低,即植物受到Cd胁迫后表现出根变短变粗、根毛缺乏、侧根分枝减少等症状,这与前人研究结果[13-16]基本一致。Cd胁迫下植物根系平均直径增加,一方面由于Cd诱导小麦根部皮层细胞数量增多,另一方面由于Cd胁迫下根毛及侧根减少,主根在根系中相对比重增大,使得根系平均直径增加。

3.3 黑麦草根形态与Cd吸收转运的相互关系

植物根系形态发育可塑性是植物在特定环境下的生存策略[33],Cd胁迫严重影响植物的根系发育[34],而植物根系形态和结构变化又能反过来影响根系对Cd吸收和木质部的装载效率,从而影响Cd在植物体内的转运和积累[9, 35]。修复植物的重金属富集量,特别是地上部分重金属富集量是影响其修复潜力的重要指标。通常认为,作为植物吸收器官的根系越发达,越利于植物对重金属Cd的吸收,这在小麦[13-14, 16]、花生[36]、油菜[32, 37]、拟南芥[34]等多种植物品种或生态型的比较研究中得到证实。本研究结果表明,反映黑麦草根系大小的形态学指标(根长、根表面积、根体积、根尖数)均与地上部分及根部Cd富集量呈极显著正相关关系,根平均直径与地上部分及根部Cd富集量均呈极显著负相关关系,这与前人研究结果[10, 12, 38]基本一致。但与高茜蕾等[38]和Lu等[10]研究结果不同,本研究中黑麦草根形态学指标与地上部分及根系Cd含量呈显著或极显著负相关关系。这一方面由于在黑麦草根形态指标(根长、根表面积、根体积、根尖数)较高的磷灰石、石灰处理中,生物有效性高的土壤有效态Cd含量低,导致植物吸收的Cd含量低;另一方面,黑麦草根形态与植物吸收营养物质密切相关,根长、根表面积、根体积、根尖数等指标与生物量呈极显著正相关关系,较发达的根系可有效促进黑麦草的生长,稀释了黑麦草吸入植株体内的Cd,从而导致磷灰石、石灰处理下黑麦草地上部分及根系Cd含量降低。

转运系数和富集系数是表征植物对重金属转移和吸收能力的重要指标[13]。本研究不同处理间黑麦草对Cd的转运系数(转移能力)无显著差异,黑麦草对Cd的转运系数与根形态指标间均无显著相关性,这表明对于某特定植物种类而言,土壤酸碱性、重金属有效性、植物根形态等变化对其转移重金属能力影响不显著,特定植物转移重金属的能力可能与其本身遗传特征有很大关系。而磷灰石(低剂量磷灰石除外)、石灰处理后黑麦草对Cd的富集系数(吸收能力)显著高于CK处理,这表明磷灰石、石灰处理显著影响了黑麦草对Cd的吸收能力。由黑麦草Cd富集系数的计算方法可知,Cd富集系数由黑麦草Cd含量及土壤Cd含量决定,与黑麦草Cd含量呈正比,与土壤Cd含量呈反比,试验中土壤Cd含量变化不显著,所以Cd富集系数变化主要来自于黑麦草Cd含量的变化。植物根长、根表面积、根体积、根尖数等指标增加,可有效增大植物根系与土壤及土壤溶液接触面积,在促进植物根系对营养物质吸收的同时增加了植物对重金属Cd的吸收,试验结果显示黑麦草Cd富集系数与根长、根表面积、根体积、根尖数均呈极显著负相关关系,这表明植物对营养物质的吸收速率高于其对Cd的吸收速率。

4 结论

Cd污染土壤施入中、高剂量磷灰石、石灰后,土壤pH显著增加,土壤有效态Cd含量显著降低,黑麦草地上部分及根系生物量、根长、根表面积、根体积、根尖数均显著增加,但黑麦草根平均直径显著降低;黑麦草地上部分及根系Cd含量显著降低,Cd富集量显著增加,黑麦草Cd富集系数显著降低。

选取土壤pH、有效态Cd含量、植物生物量、Cd含量、Cd富集量、根形态、Cd富集系数等指标综合考察Cd污染土壤“改良剂-植物”联合修复技术的效果,表明磷灰石和石灰等改良剂能显著降低土壤有效态Cd含量,促进植物的生长及其对Cd的富集,进而保证植物修复技术更好地实施,其中施入24 g·kg-1剂量磷灰石并种植黑麦草的联合修复技术对Cd污染土壤的修复效果显著,适于在酸性、中度Cd污染土壤上推广应用。

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