.基于正交设计的畜禽废水处理中活性污泥DNA的16S rDNA-PCR扩增体系[J].农业环境科学学报,2008,0(5):. |
基于正交设计的畜禽废水处理中活性污泥DNA的16S rDNA-PCR扩增体系 |
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DOI: |
中文关键词: SBR 冻融 PCR扩增 正交设计 |
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中文摘要: |
用SBR反应器处理畜禽废水,提取其中好氧活性污泥总DNA,比较3种物理破壁方法对DNA质量的影响,同时选择4个因素(DNA模板,Mg2+,dNTP,引物)对16S rDNA-PCR反应体系进行正交优化,并确定最适退火温度。结果表明,反复冻融法的DNA纯度大于玻珠振荡法和摇床振荡法,可不经纯化直接扩增;DNA浓度对PCR结果影响最大,Mg2+和dNTP浓度的影响次之且程度相同,引物浓度影响最小;最佳PCR扩增体系(25 μL)的组成为:模板DNA 0.32 μg, dNTP 200 μmol·L-1, Mg2+1.5 mmol·L-1,引物1.0 μmol·L-1,Taq DNA 聚合酶0.2U,且最适退火温度为56.5 ℃。 |
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